ELISA试剂盒酶联免疫法基本原理及注意事项

ELISA试剂盒酶联免疫法留神事项：
⒈ 正式试验时，应别离以阳性对照与阴性对照操控试验条件，待检样品应作一式二份，以保证试验效果的性。有时本底较高，说明有非特异性反响，可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
⒉ 在ELISA中，进行各项试验条件的挑选是很首要的，其间包含：
⑴ 固相载体的挑选：很多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其办法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。当时常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，查询其显色反响是不是均一性，据此判明其吸附功能是不是超卓。
⑵ 包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体外表时，央求纯度要好，吸附时一般央求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响，一般多选用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不一样的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相一同，查询阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。
⑶ ELISA试剂盒酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶符号抗体部份）。然后再固定其它条件或选用“方阵法"（包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体别离为不一样的稀释度）在正式试验系统里地滴定其作业浓度。
⑷ 酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选央求是价廉、安全、有明显地显色反响，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌效果，应留神防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是当时较为满意的供氢体。底物效果一段时刻后，应参加强酸或强碱以间断反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制造，尤其是H2O2在临用前参加。①使抗原或抗体结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测守时，把受检标本（测定其间的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不一样的进程与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与其他物质分隔，终究结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化变为有色商品，商品的量与标本中受检物质的量直接有关，故可根据色彩反响的深浅来进行定性或定量分析。因为酶的催化频率很高，故可很大地拓展反响效果，从而使测定办法抵达很高的敏感度。
ELISA试剂盒可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定办法中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体
②酶符号的抗原或抗体
③酶效果的底物。根据试剂的来历和标本的性状以及检查的具备条件，可规划出各种不一样类型的检查办法。