ELISA试剂盒试验抗体的制备办法

ELISA试剂盒途径的挑选决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，通常不宜选用静脉打针。
不一样个别对共同抗原的反响性不一样，并且不一样抗原发生免疫反响的才能也有强有弱，因而常常在打针抗原的一起，参加能增强抗原的抗原性物质，以影响机体发生较强的免疫反响，这种物质称为免疫佐剂。
免疫前取等容积*或不*佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需求量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴参加等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再承继研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内*不涣散中止。
穿插反响率低，标明抗血清的特异性好，反之则特异性差。
搜集的血液置于室温下1h分配，凝集后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）分出血清，离心，4000rpm，10min。
取兔血有两种办法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，二是颈动脉入血，也可心脏采血。加强免疫时用不*佐剂，初度免疫时皮下打针百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不用打针百日咳疫苗。
在无菌条件，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后储存。
取动脉或静脉放血时，将兔放入一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人抓住兔身。
防止扔掉抗原，亦可用一打针器装抗原液，另一打针器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管联接，然后二者往复重复抽吸，约数十分钟后即能*乳化。
每2～3周加强免疫一次。
制作办法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
ELISA试剂盒特异性是以穿插反响率来标明的。
ELISA试剂盒穿插反响率通常是用竞赛按捺曲线来断定的。
若用兔，用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。
家兔是zui常用以发生抗体的动物，因而这儿首要议论兔血的搜集。
颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开肌肤，暴露颈动脉，插管，放血。
不一样浓度的抗原和近似抗原物质别离做竞赛按捺曲线，核算各自的联络率（B/T或B/B0），求出各清闲IC50时的浓度，按下列公式核算穿插反响率。二礼拜后，可在另一耳放血。
此法可重复屡次放血。
作免疫用的动物有哺乳类和禽类，首要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，试验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。
在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，查看抗体效价。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血，鼠等小动物取血可参看有关资料。
剪去耳缘的毛，用少量二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩大、充血。用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，灵敏切开动脉或静脉，血液即流出，每次可搜集30～40ml。
抗原剂量，初度剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为初度剂量为1/4分配。
C冰箱保存。查看合格后即以其中一打针器作打针用。
佐剂除了延伸抗原在体内的存留时间，添加抗原影响作用外，更首要的是，它能影响网状内皮体系，使介入免疫反响的免疫活性细胞增多，推动T细胞与B细胞的彼此作用，然后增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的发生。
ELISA试剂盒未到达预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时中止。