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    Elisa实验中血清的采集及注意事项

    发布时间: 2018-11-09  点击次数: 171次

    ELISA试剂盒实验中,对于采集血清经常碰到很多问题:

    1、标本采集后什么时候开始离心,有说采集半小时后离心的,还有说采集全血后在4℃过夜,再离心,如果采集后7-8小时再离心可以吗?

    2、离心时多少转、离心几分钟比较合适

    血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP 为标记的ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。

    实验中,标本离心越早越好,但多数标本要30分钟后才凝集完毕,离心时间zui好在2小时内完成,(尤其生化)时间太长血液中的细胞成分会分解血浆中有机成分,离子也会发生转移造成误差;4度冷藏虽能降低红细胞活性但细胞还会进行缓慢无氧酵解,血糖会明显减低,冷藏时需分离血清储存;对于酶免试验影响较小,但时间太长也会引起偏差如蛋白质变性,水分蒸发造成误差离心速度一般要求1500~3000转之间(25000转),离心速度低会离心不完全,速度过快容易溶血,一般离心5~15分钟即可(约10分钟)。

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