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Elisa实验中血清的采集及注意事项
发布时间： 2018-11-09 点击次数： 1889次ELISA试剂盒实验中，对于采集血清经常碰到很多问题：
1、标本采集后什么时候开始离心，有说采集半小时后离心的，还有说采集全血后在4℃过夜，再离心，如果采集后7-8小时再离心可以吗？
2、离心时多少转、离心几分钟比较合适
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
实验中，标本离心越早越好，但多数标本要30分钟后才凝集完毕，离心时间在2小时内完成，（尤其生化）时间太长血液中的细胞成分会分解血浆中有机成分，离子也会发生转移造成误差；4度冷藏虽能降低红细胞活性但细胞还会进行缓慢无氧酵解，血糖会明显减低，冷藏时需分离血清储存；对于酶免试验影响较小，但时间太长也会引起偏差如蛋白质变性，水分蒸发造成误差离心速度一般要求1500~3000转之间（25000转），离心速度低会离心不*，速度过快容易溶血，一般离心5~15分钟即可（约10分钟）。
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