您好,欢迎进入研域(上海)化学试剂有限公司网站!
一键分享网站到:
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 研域生物:抗体和重组蛋白的稳定性你料及多少呢?

    研域生物:抗体和重组蛋白的稳定性你料及多少呢?

    发布时间: 2019-06-06  点击次数: 167次

    1. 收到抗体和重组蛋白后的操作
     
    收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态),请必须在 4℃,12000rpm,离心 3 分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(假如抗体和重组蛋白体积小于 50µl,请延伸离心时刻至 5 分钟,以保证悉数抗体和重组蛋白均离心下来,干粉状况的相同适用)。抗体和重组蛋白运用特制的贮存管,只要在 12000rpm 离心 3 分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白悉数离心下来(即使是在 10000rpm 离心也会离心不彻底,导致出现抗体和重组蛋白的量缺乏的现象)。请具体阅览说明书,并依照引荐的保存条件正保证存和运用抗体和重组蛋白。
     
    2. 抗体和重组蛋白的长时刻保存
     
    关于大部分抗体和重组蛋白,比较合适的保存办法是:抗体分装后保存在-20℃,重组蛋白分装后保存在-80℃。
     
    (1)分装可以da程度的降低重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害,同时也降低了由于屡次从同一管中吸取抗体和重组蛋白形成的污染可能性。
     
    (2)分装的量以一次试验用完为好,少不能少于 10µl 每份。由于分装体积越小,抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸腾以及管壁吸附的影响。
     
    (3)复融后的分装抗体和重组蛋白假如一次用不完,将剩余母液保存在 4℃,防止再冻起来。
     
    (4)抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完,4℃ 保存尽量不要超过 1 天。
     
    (5)防止将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,防止温度变化形成重复冻融。
     
    3. 抗体和重组蛋白的短期保存
     
    大部分 的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 时刻短保存 1~2 周,对抗体和重组蛋白活性没有影响。假如抗体和重组蛋白很快会运用(1~2 周内),引荐在 4℃ 保存,这是为了防止重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害。关键的一点是要根据说明书引荐的办法来正确的保存抗体和重组蛋白。
     
    4. 抗体和重组蛋白的运送条件
     
    一般的运送进程需要 1~2 周的时刻,所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运送首要的意图是为了防止重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害(假如运用干冰运送,那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的,为了分装就需要冻结,这就多了一次冻融的进程),所以运送进程中一般防止干冰运送。
     
    5. 抗体和重组蛋白的稳定性
     
    (1)抗体的稳定性是自然界长时刻进化的结果,抗体是免疫系统中重要的分子之一,其稳定性是自然进化挑选的结果,在很多物种中,抗体分子形成了保守而稳定的结构。
     
    (2)抗体的高Tm值,在室温下,乃至短时刻温度到达 50~60℃,抗体分子都能保持正确折叠,坚持其应有的活性。
     
    (3)抗体和重组蛋白的纯度。选用先进的抗体和重组蛋白纯化技能,保证抗体和重组蛋白产品的高纯度,保证其抗体和重组蛋白产品的稳定性。
     
    (4)抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可削减容器表面吸附形成的物质损失,高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。大部分抗体和重组蛋白浓度为 1 mg/ml,抗体和重组蛋白纯度高,特异性好,效价更高。 
     
    6. 重组蛋白的特性
     
    重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存方式,原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状况,真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存,这样使得重组蛋白非常稳定,在-80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在运用前需进行溶解,其间溶解的办法非常关键,由于溶解不好会降低蛋白的功效。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释运用进程中也需要细心注意,这些都是用户在实践运用中常常遇到的问题。
     
    (1)原核细胞表达的重组蛋白。大肠杆菌表达的冻干重组蛋白,现已从包涵体中提纯,添加了蛋白保护剂,运用过滤后的无菌水作为复溶剂即可,复溶冻干蛋白 100 µg,用 86µl 的超纯水,轻轻摇晃使蛋白溶解,再用移液枪的枪头轻吹几下即可彻底溶解,必定不能运用涡旋仪进行快速振动或剧烈摇晃。
     
    (2)真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译,还要进行翻译后的加工,使得蛋白质的空间折叠办法保持正常,所以重组蛋白必须在真核细胞中进行,如哺乳动物细胞可以识别和去除基因中的内含子,对翻译后的蛋白质进行加工,这样表达的蛋白质具有生物活性。咱们用溶液态来保存,坚持了其良好的活性和稳定性。
     
    (3)重组蛋白的保护剂。在冻干和贮存进程中常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。咱们一般加 8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻挠蛋白质二级结构改动以及冻干进程中蛋白质的扩展和集合,甘露醇也是一种遍及运用的冻干保护剂和填充剂。

在线客服 联系方式

服务热线

021-54479081
021-54461587