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    研域跟你详谈ELISA夹心法中抗体质量的重要性(请猛戳)

    发布时间: 2019-07-11  点击次数: 131次

    理论上运用公认挑选的亲和纯化抗体可得到高特异性,高敏感度的免疫测定。但是,由于经济原因或是缺乏适宜的试剂,使得许多工作者采用低纯度的制品,这种试剂一般含有与试验中其它成分起交叉反响的抗体。现已发现在用抗人IgG抗血清的抗体时,抗体中含有不需要的抗体交叉反响。但当运用亲和纯的抗血清时,交叉反响不明显。

    研讨任何ELISA系统,为了控制不需要的交叉反响,就要不吝运用亲和纯试剂。运用抗IgG血清抗体作为包被抗体,有时本底确实很低,但它的敏感度比仅运用亲和纯制品要低50-100倍。在高敏感度的试验中使用关闭试剂是很重要的。zui终挑选非亲和纯抗IgG血清抗体是根据这样设想:包被抗体或是结合的人IgG(抗原)与指示抗体有交叉反响,则过量的与指示抗体同种动物的血清,就可以关闭与酶标抗体的不要的结合。但是人血清白蛋白中含有少数的IgA和IgG会干扰检测。人血清白蛋白只适用于IgE的测定。同样,不能用牛血清白蛋白。由于其间含有微量的牛IgG。

    抗血清抗体与亲和纯抗体对ELISA夹心法成果的影响可从下面试验看出:

    试验A:包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体,指示抗体(检抗)为粗制山羊抗人IgG抗体

    试验B:包被抗体为亲和纯的绵羊抗人IgG抗体,指示抗体(检抗)为粗制山羊抗人IgG抗体

    试验C:包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体,指示抗体为亲和纯的山羊抗人IgG抗体

    试验D:包被抗体和指示抗体都是亲和纯的兔抗人IgG抗体。

    试验中运用5%血清(与指示抗体同物种来历)进行关闭,其他夹心法ELISA步骤相同。
                       
    成果显现,当粗制的抗IgG血清抗体被用在夹心法的两头(如试验a曲线)时,本底很高且曲线坡度不明显。虽然能成功使用此抗体类型,但问题是一种抗体结合另一种抗体。可能发生了山羊指示抗体结合了绵羊包被抗体,由于稀释液中的山羊血清过剩也不能下降本底值。当使用亲和纯化的包被抗体时(如试验b曲线),本底恰当下降而且形成了规范曲线。但是,大多数工作者认为本底仍偏高,工作范围有限(2-60ng/ml)。当亲和纯的指示抗体与粗制包被抗体联合运用时(如试验c曲线),本底大大较低,但敏感度约为100-200ng/ml,再者工作范围仍受限。当完全运用亲和纯的抗体时(如试验d曲线),本底低,敏感度大大改进且工作范围广(2-500ng/ml)。

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