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    捕获包被法检测抗体和捕获包被法检测抗体

    发布时间: 2019-08-02  点击次数: 149次

    捕获包被法检测抗体
       
    捕获包被法(亦称反向间接法)ELISA,首要用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。以目前最常用的IgM测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在,则后者可搅扰IgM的测定。因此先将一切血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于流行症的前期确诊中。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其间包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后参加抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶符号针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的前期确诊。类风湿因子(RF)相同能搅扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反响。因此中和IgG的间接法近来颇受喜爱,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
        

    捕获法测抗体的扼要操作过程:
        
    1)特异性捕获抗体的包被,先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体外表;
        
    2)参加待测样品,通过固定在载体外表的针对该抗原的抗体固定于载体外表;
        
    3)参加特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体;
        
    4)参加酶促反响底物,发作显色反响,显色的深浅与待测抗体的量成正比。
        

    捕获包被法检测抗体
        
    近年在亲和素-生物素体系上又发展出ABS-ELISA法 。亲和素是一种糖蛋白,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成,生物素为小分子化合物。用化学办法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶构成生物素符号产品,符号办法颇为简洁,并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素体系,简称ABS(avidin-biotin system)。因为亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极端安稳,使BAS符号技能比惯例酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技能有着更高的灵敏度,为微量抗原、抗体的检测拓荒了新的途径,大大提高了检测的灵敏度,但该办法比一般ELISA多用了两种试剂,增加了操作过程,因此在临床查验中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分为酶符号亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素符号的抗体(或抗原)代替原ELISA体系中的酶标抗体(抗原)。
        

    在LAB法中,将特异性抗体生物素化、酶分子符号在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反响即可检出抗原,因此提高检测的敏感度。
        

    ABC法相同将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上,亲和素和酶标生物素需要先按必定比例构成ABC复合物,这种网络结构结合了很多的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱满时,生物素化抗体即可与之结合, 使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

     

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