捕获包被法检测抗体和捕获包被法检测抗体

捕获包被法检测抗体
   
捕获包被法（亦称反向间接法）ELISA，首要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。以目前常用的IgM测定为例，因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在，则后者可搅扰IgM的测定。因此先将一切血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于流行症的前期确诊中。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其间包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后参加抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶符号针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的前期确诊。类风湿因子（RF）相同能搅扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反响。因此中和IgG的间接法近来颇受喜爱，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
    

捕获法测抗体的扼要操作过程：
    
1）特异性捕获抗体的包被，先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体外表；
    
2）参加待测样品，通过固定在载体外表的针对该抗原的抗体固定于载体外表；
    
3）参加特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体；
    
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
    

捕获包被法检测抗体
    
近年在亲和素-生物素体系上又发展出ABS-ELISA法 。亲和素是一种糖蛋白，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成，生物素为小分子化合物。用化学办法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶构成生物素符号产品，符号办法颇为简洁，并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素体系，简称ABS（avidin-biotin system）。因为亲和素与生物素间的亲和力*，结合迅速，且安稳，使BAS符号技能比惯例酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技能有着更高的灵敏度，为微量抗原、抗体的检测拓荒了新的途径，大大提高了检测的灵敏度，但该办法比一般ELISA多用了两种试剂，增加了操作过程，因此在临床查验中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分为酶符号亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素符号的抗体（或抗原）代替原ELISA体系中的酶标抗体（抗原）。
    

在LAB法中，将特异性抗体生物素化、酶分子符号在亲和素分子上，生物素化抗体与被检抗原结合后，再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上，经酶促反响即可检出抗原，因此提高检测的敏感度。
    

ABC法相同将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上，亲和素和酶标生物素需要先按必定比例构成ABC复合物，这种网络结构结合了很多的酶分子，当亲和素尚未被酶标生物素饱满时，生物素化抗体即可与之结合, 使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。