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    研域小课堂:关于细胞传代方法您做对了吗?

    发布时间: 2019-09-05  点击次数: 106次

    经过自主研发和兼并重组不断扩展企业产品线,逐步发展为试剂的专业制造商和电子商务集成供应商,成为全球试剂职业发展的者。在开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。

    一:细胞与试剂方面:

    1、细胞(单层细胞,镜检合适)

    2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等合适细胞有要求的培养液)

    3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)

    4、7.5%NaHC03 溶液

    5、0.25%胰蛋白酶

    6、 PBS 洗液。

    二;试验小用具方面:

    1、小方瓶(100m1)

    2、克氏瓶

    3、胶塞

    4、吸管(10ml、1m1)

    5、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)

    6、C02 孵箱

    7、超净台

    8、倒置显微镜

    9、4℃、- 20℃冰箱
     
    三:细胞传代的操作过程

    1、挑选细胞:镜检细胞,挑选成长状态杰出,细胞界限清晰,具有立体感,形状好无污染、无反常及可疑病变细胞。

    2、制造细胞培养液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,参加灭活小牛血清10m1,庆大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。

    3、消化细胞:先用PBS 洗液冲刷细胞外表1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内参加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液彻底覆盖细胞外表。

    4、至细胞彻底脱落到胰酶中:每瓶参加10m1 细胞培养液吹打涣散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再参加10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。

    5、加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片(由细胞接种浓度决定)。

    6、填写传代记录。

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