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    研域干货:植物安排样本的前处理

    发布时间: 2019-10-29  点击次数: 288次

    一、匀浆介质 

     

    一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定目标的情况自行设定浓度,意图是坚持样本的等渗环境。 

     

    二、安排匀浆的制备 

     

    1、取安排块(0.2g~0.5g)可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,称重,放入5ml的匀浆管中。 

     

    2、按重量(g):体积(ml)=1:4的比例参加4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎安排块。 

     

    3、匀浆的方式:手艺匀浆,机器匀浆。 

     

    ① 手艺匀浆:左手持匀浆管将下端刺进盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直刺进套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充沛研碎,制成20%的匀浆液。 

     

    ② 机器匀浆:用安排捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成20%安排匀浆,也可用内切式安排匀浆机制备(匀浆时刻10秒/次,间隙30秒,接连3~5次,在冰水中进行,可适当延伸匀浆时刻),
     

    4、将制备好的20%匀浆液用一般离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定. 

     

    三、样本保存: 

     

    植物安排样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中心如不重复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。 制备好的匀浆液建议不要冻存,当天进行测定,如放置时刻过长相关酶活会有所下降,部分目标4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,总蛋白测定可存5~7天。

     

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