您好,欢迎进入研域(上海)化学试剂有限公司网站!
一键分享网站到:
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 研域干货:培养细胞样品怎么处理?

    研域干货:培养细胞样品怎么处理?

    发布时间: 2019-11-14  点击次数: 271次

    样本处理的方法:


    1. 融解RIPA裂解液,混匀。取恰当量的裂解液,在运用前数分钟内参加PMSF,使PMSF的终浓度为1mM。


    2. 关于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(假如血清中的蛋白没有干扰,能够不洗)。依照6孔板每孔参加150-250微升裂解液的份额参加裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充沛触摸。一般裂解液触摸细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

     

    3. 充沛裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。


    关于安排样品:


    1. 把安排剪切成细微的碎片。


    2. 融解RIPA裂解液,混匀。取恰当量的裂解液,在运用前数分钟内参加PMSF,使PMSF的*终浓度为1mM。


    3. 依照每20毫克安排参加150-250微升裂解液的份额参加裂解液。(假如裂解不充沛能够恰当添加更多的裂解液,假如需求高浓度的蛋白样品,能够恰当减少裂解液的用量。)


    4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充沛裂解。

     

    5. 充沛裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。


    6. 假如安排样品自身非常细微,能够恰当剪切后直接参加裂解液裂解,经过强烈vortex使样品裂解充沛。然后同样离心取上清,用于后续试验。直接裂解的长处是比较方便,不用运用匀浆器,缺陷是不如运用匀浆器那样裂解得比较充沛。

产品中心 Products
在线客服 联系方式

服务热线

021-54479081
021-54461587

扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站