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    本周焦点 ELISA试验操作失败的主要原因

    发布时间: 2019-11-29  点击次数: 333次

    我们知道,ELISA测定中影响要素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在查验中除正常反响外,有时常可见到一些过错结果(即假阳性或假阴性),那么致使试验不成功的主要原因有哪些咧?

     

    榜首:标本的影响:

    溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易发生假阳性。或许是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),在洗刷过程中往往难以彻底洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,发生假阳性。所以严峻溶血标本禁用。
       
    第二,标本受细菌污染:

    因菌体中或许含有内源性辣根过氧化物酶,因而,被细菌污染的标本同溶血标本相同,亦可发生非特异性显色而搅扰测定结果。
       
    第三,标本保存不妥:

    在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、形成假阳性;为克服上述搅扰,ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜收集;如不能立即测定,5d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质部分浓缩,分布不均,应充沛混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振动。
       
    第四,标本凝结不全:

    在工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块,易形成假阳性结果;因而血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清。

     

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