您好,欢迎进入研域(上海)化学试剂有限公司网站!
一键分享网站到:
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 六步两留意:关于试验制得细胞的样本

    六步两留意:关于试验制得细胞的样本

    发布时间: 2020-02-10  点击次数: 182次

    我们在做一项试验的时候,需要了解的过程与所需物品是必不可少的。而今天,我司在这里要给朋友们共享的便是试验制得细胞的样本,您需做好下文中的这六步两留意。所谓的六步两留意也便是操作的六个过程,和两条留意事项,下面我们就来具体的看看吧。
    试验之前,我公司的技术人员为朋友们特别准备说明晰所需的物品有哪些:
    1、培养基;不含酚红的DMEM培养基
    2、处理玻片:将多聚赖氨酸溶液(溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓冲液中),涂布于玻片上,枯燥后即可使用。或许APES 2ml溶于100ml丙酮中,将玻片浸泡入内,取出晾干,180℃枯燥备用。
    3、洗刷液;0.1M,pH7.2~7.4PBS
    4、细胞固定液:4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2~7.4)含有1/1000 DEPC。
    5、乙醇:70%  90%  100%
    6、胃蛋白酶溶液:用0.1N HCl将其稀释为100μg/ml
    7、设备:烤箱,CO2培养箱,倒置显微镜,玻璃载玻片,原位杂交专用盖玻片,温箱,加样器和吸头等。
    操作过程:
    1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加在处理的载玻片上,用培养基培养,时间经过预试验确定;
    2、细胞长好后,用洗刷液洗2分钟×3次,室温下将其放入细胞固定液中固定30-60min,蒸馏水洗刷;
    3、室温下用洗刷液充分洗刷固定细胞,(枯燥后-20℃冰冻保存2周以上)
    4、杂交前将固定的细胞进行如下处理;顺次在70%,90%,100%的乙醇中浸泡,脱水每次5min,用二甲苯洗刷,除掉残留脂质顺次在100%,90%,70%乙醇中浸泡,进行再水化,每次5min,zui后浸泡于洗刷液中;
    5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理固定的细胞,以添加细胞对大分子试剂的通透性,再用洗刷液洗5min;
    6、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗净。
    留意!
    1、所有溶液都必须用RNA酶按捺剂处理。
    2、操作中重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以按捺RNA酶对mRNA的分解效果。此外,过度固定对原位杂交有显着的不利影响。

产品中心 Products
在线客服 联系方式

服务热线

021-54479081
021-54461587

扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站