学会这些问题，攻克ELISA试验垂手可得！！！

Q1.标曲不显色或显色很弱，样本显色

溶解标准品以及倍比稀释时，未涡旋震动或不够充沛。标准品溶解、倍比稀释时均需要涡旋震动以确保充沛混匀。单纯依托移液器重复吹打，效率较低、作用也不一定jia。

Q2.标曲和样本均不显色

在孵育阶段静置在桌面上，这样非常不利于抗原抗体之间的充沛接触，导致显色偏弱。引荐孵育阶段，运用ELISA的微孔板振荡器，调至适宜的频率，使抗原抗体充沛接触，确保结合作用。

Q3.标曲显色，样本不显色

当样本中意图蛋白浓度极低或许样本中干扰因素较强，就无法检测到。现在ELISA仍然是蛋白检测灵敏度gao的方法，与不同技术结合后，衍生出了多种类型的ELISA，提高了检测灵敏度。

Q4.标曲和样本都显色，但复孔的CV大

这个问题就跟移液器和试验者的操作有关了。移液器的运用保护不标准，就会形成移液的差错较大；试验者自身的操作习气、加样的一致性对复孔的CV也有很大影响。把握移液器的正确运用和保护。关于个人的操作可操练移液动作、加快速度，确保移液的精密度。

Q5.本底偏高，样本值测不到

标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(对于高敏ELISA可以适当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时分，本底过高会掩盖意图信号，导致无法测到样本值。
在参加TMB显色后，需实时调查标曲显se状况。通常在S5孔有肉眼可见的微弱蓝色，即可停止反应。

Q6.样本经不同梯度稀释，核算得到的样本值差异较大

有时分我们不清楚样本中意图蛋白的浓度怎么，应该怎么稀释，那么我们就会做下预试验，确认稀释倍数。然而有时分同一样本做了几个不同梯度稀释后，核算得到的样本值之间差异较大，应该选择哪一个稀释倍数呢？

Q7.不同试剂盒中的组分能否通用

除非是公用的试剂如洗液、检测缓冲液，其它组分不主张用其它试剂盒的组分，乃至是同一指标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包含标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的，假如贸然运用其它试剂盒的组分，有可能对结果产生影响。