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    学会这些问题,攻克ELISA试验垂手可得!!!

    发布时间: 2020-04-21  点击次数: 135次

    Q1.标曲不显色或显色很弱,样本显色


    溶解标准品以及倍比稀释时,未涡旋震动或不够充沛。标准品溶解、倍比稀释时均需要涡旋震动以确保充沛混匀。单纯依托移液器重复吹打,效率较低、作用也不一定jia。


    Q2.标曲和样本均不显色


    在孵育阶段静置在桌面上,这样非常不利于抗原抗体之间的充沛接触,导致显色偏弱。引荐孵育阶段,运用ELISA专用的微孔板振荡器,调至适宜的频率,使抗原抗体充沛接触,确保结合作用。


    Q3.标曲显色,样本不显色


    当样本中意图蛋白浓度极低或许样本中干扰因素较强,就无法检测到。现在ELISA仍然是蛋白检测灵敏度gao的方法,与不同技术结合后,衍生出了多种类型的ELISA,提高了检测灵敏度。


    Q4.标曲和样本都显色,但复孔的CV大


    这个问题就跟移液器和试验者的操作有关了。移液器的运用保护不标准,就会形成移液的差错较大;试验者自身的操作习气、加样的一致性对复孔的CV也有很大影响。把握移液器的正确运用和保护。关于个人的操作可操练移液动作、加快速度,确保移液的精密度。


    Q5.本底偏高,样本值测不到


    标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(对于高敏ELISA可以适当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时分,本底过高会掩盖意图信号,导致无法测到样本值。
    在参加TMB显色后,需实时调查标曲显se状况。通常在S5孔有肉眼可见的微弱蓝色,即可停止反应。


    Q6.样本经不同梯度稀释,核算得到的样本值差异较大


    有时分我们不清楚样本中意图蛋白的浓度怎么,应该怎么稀释,那么我们就会做下预试验,确认稀释倍数。然而有时分同一样本做了几个不同梯度稀释后,核算得到的样本值之间差异较大,应该选择哪一个稀释倍数呢?


    Q7.不同试剂盒中的组分能否通用


    除非是公用的试剂如洗液、检测缓冲液,其它组分不主张用其它试剂盒的组分,乃至是同一指标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包含标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的,假如贸然运用其它试剂盒的组分,有可能对结果产生影响。

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