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    我司课堂:关于细胞的样的保存,您需做好这六步两留意!!

    发布时间: 2020-05-28  点击次数: 159次

    ◎操作步骤:

     

    1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加在处理的载玻片上,用培育基培育,时间通过预试验确定;

     

    2、细胞长好后,用洗刷液洗2分钟×3次,室温下将其放入细胞固定液中固定30-60min,蒸馏水洗刷;

     

    3、室温下用洗刷液充沛洗刷固定细胞,(干燥后-20℃冰冻保存2周以上)

     

    4、杂交前将固定的细胞进行如下处理;顺次在70%,90%,100%的乙醇中浸泡,脱水每次
    5min,用二甲苯洗刷,除掉残留脂质顺次在100%,90%,70%乙醇中浸泡,进行再水化,每次5min,后浸泡于洗刷液中;

     

    5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理固定的细胞,以增加细胞对大分子试剂的通透性,再用洗刷液洗5min;

    6、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗净。

     

    ◎留意!

       
    1、所有溶液都必须用RNA酶抑制剂处理。
        

    2、操作中重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

     

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