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    研域解析:关于原代细胞应该怎么提取?

    发布时间: 2020-09-22  点击次数: 166次

    原代细胞是指直接从机体取出的安排或细胞获得单个细胞并在体外进行培育的细胞。这里的安排主要指:安排器官、外周血及胚胎等。由于原代细胞成长缓慢,繁衍必定的代数中止成长。所以一般认为:培育的原代的1代和传代到10代以内的细胞统称为原代细胞培育。


    原代细胞的提取的整个操作过程:


    1.整个操作要在洁净通风的超净台下进行,所有的器件要高压消毒。


    2.依据BALB/c小鼠的体重,用10ml/kg3%浓度的麻醉;将小鼠置于盛有75%乙醇的烧杯内,这一步不只能够消毒,也能够让小鼠体毛浸湿,后续剃去皮毛的时分不会沾到剪刀或安排上。


    3.用镊子轻轻挑起小鼠的心脏,装有PBS的注射器刺进心尖,同时在右心耳处剪开一个小口,缓慢推进注射器,随着心脏的跳动,将体内的血液冲洗出来。


    4.取出小鼠的肺部安排,将肺安排切成小米粒样的巨细,置于预冷的HBSS中反复冲洗几回。


    5.将小米粒巨细的肺安排置于培育瓶中(培育瓶前一天用1%明胶溶液包被培育面,4度过夜,小鼠处理前,将培育瓶放置培育箱中,使其温度恢复至37度),置于培育箱37度的环境下,消化4个小时。


    6.消化4小时后,参加RPMI1640培育基(有10%血清、1%双抗、1%内皮细胞成长因子)10ml(首次增加培育基,能够是正常培育时的2倍量),持续培育24小时(持续培育的时刻可依据细胞贴壁状况适当调整)。


    7.24小时后,取出肺安排,镜下观察细胞状态,换液。


    8.原代细胞的提取和培育是很慢的过程,一般需比及24小时后,才能在镜下看到些许细胞群,一周到两周后才会看到鹅卵石样的摆放状况。


    9.原代细胞2-3天换液一次,由于内皮细胞成长形成单层时,会出现接触抑制现象。所以,内皮细胞成长挨近单层时就能够传代了,不要比及长得非常满。

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