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    我司详述ELISA实验失败之后的解决方案

    发布时间: 2020-10-14  点击次数: 59次

    一:试剂因素

    1. 首先试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。ELISA试剂盒不同厂家的试剂一定不能混用,包括底物和洗涤液。

    2. 由于校准标准有差异,还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。

    如:有的厂家酶标板孔间CV值大于20%,标记酶的活性及显色液的稳定性比较差,使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。

    3. 要注意试剂的批号和出厂日期,虽然试剂的有效期多为1年,选择刚出厂的试剂盒。避免选择假的ELISA试剂盒。有些厂家为夸大生产ELISA的指标范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。

    4. 比如用TGF beta这样的指标代替大多数试剂盒的其它指标作为检测抗体,同样可以获得良好的标准曲线。因为TGF beta在大多数哺乳动物中都有广泛表达,种属间的氨基酸序列同源性达100%,TGF beta随着其他因子的影响,其表达水平也会发生相应的变化,使得实验者难以查觉。

     

    在分析完以上可能出现的因素后,专家给到以下鉴别方法,大家可以直接去搜索如何鉴别真假ELISA试剂盒。

    1.利用干扰实验可辨别ELISA试剂盒是否检测目的抗原。

    2.如果购买了同一公司的ELISA试剂盒A和B,利用交叉实验可辨别ELISA试剂盒真伪。

    3.指标本身也可以鉴定试剂盒的真伪。

    2.标本因素和操作因素

    血清是常用的ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种:

     

    二:内源性物质

    有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,ELISA试剂盒可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。

     

    三:外源性物质

    外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

    所以,当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时,应该首先考虑试剂因素,这个是做好实验获得正确数据的前提保证,其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析,并应采取相应措施排除干扰作用,从而为实验提供正确可靠的检测结果。

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