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    检测植物elisa试剂盒操作步骤

    发布时间: 2021-09-24  点击次数: 96次

    检测植物试剂盒操作步骤:

    1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

    2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

    3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

    4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

    7.温育:操作同 3。

    8.洗涤:操作同 5。

    9.显色:每孔先加入显色剂 a50μl,再加入显色剂 b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.

    10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(od 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。


    8.jpg


    计算和结果判定:

    试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00 阴性对照平均值≤0.10

    临界值(cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值 0.15

    阴性判定:样品 od 值< 临界值(cut off)者为金黄色葡萄球菌肠毒素(se)阴性 阳性判定:样品 od 值≥ 临界值(cut off)者为金黄色葡萄球菌肠毒素(se)阳性。

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