ELISA实验中基质效应该如何避免

在ELISA实验的时候，我们经常会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度，容易发生样本OD450值低于空白值的现象，特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。

什么是基质效应呢？

首先我们要知道什么是基质，基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有显著干扰，影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是ELISA试剂盒开发和使用中需要避开的雷。

如何判断是否是基质效应呢？

当单个样本或少量样本值低于空白值时，可能是实验操作出现问题，这时应增加重复，进步操作技术。当许多样本都低于空白值时，应思考基质效应的影响，建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂，有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降，便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值，或许数值为负。

虽然原因复杂，但有方法可以用来评估基质效应。

种方法是采用线性稀释，一般来讲，抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结合比例的减少，测量值也相应地产生很大改变。

第二种方法是掺入回收率实验，将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%，才符合标准。

那我们如何避免ELISA实验中基质效应？

基质效应可以通过产品研发阶段的优化尽可能去消除的。

上海研域生物针对ELISA产品研发进行了多种优化。ELISA试剂盒在开发进程中，标准品不选用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液，只能选用其仿照物。我们量身定制的缓冲液系统，这些优化后的缓冲液体系能很好消除基质效应。还有当检测某个分析物时，其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合，也会导致基质效应，我们也因此做了大量的交叉反应，确保没有明显的交叉反应和干扰。而且我们试剂盒必须通过严格的基质效应测试，全部包括线性稀释和掺入回收率实验，并把测试结果记录在说明书中。