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决定ELISA实验成败的关键-洗涤
发布时间： 2023-04-20 点击次数： 835次很多人做ELISA实验，觉得真简单，无非就是加样，保温，洗涤等操作步骤。可是实验结果经常不尽人意。今天小编就给大家总结一下ELISA实验洗涤要点，掌握这些，实验So easy！
洗涤在 ELISA 过程中不是反应聚，但却是决定实验成败的关键。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
聚苯乙烯待塑料对蛋白质的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。
在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯（吐温，Tween）一类物质即右达到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面张力物质，常作为助溶剂。
根据脂肪酸的种类而对聚山梨酯编号，结合月桂酸的为聚山梨酯 20，在 ELISA 中为常用。它的洗涤效果好，并具有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的作用。
洗涤如过没清洗干净，特别在后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高。另外，在间接法中如血清标本内的非特异性 IgG 吸附在固相上而未被洗净，也将与酶标抗体作用而产生干扰。
ELISA 板的洗涤一般可采用以下方法：
①吸干孔内反应液；
②将洗涤液注满板孔；
③放置 2 min，略作摇动；
④吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤的次数一般为 3～4 次，有时甚至需洗 5～6 次。
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