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PCR实验出现凝胶涂布货片状条带弥散的原因
发布时间： 2023-06-13 点击次数： 2578次PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）,一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的大特点，是能将微量的DNA大幅增加。PCR的原理：PCR的基本过程类似于DNA的天然复制，特异性依赖于与靶序列两端互补的Oligo引物。整个过程由变性-退火-延伸3个基本反应步骤构成。
PCR实验中扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散的原因如下：
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
（7）退火温度过低。
（8）电泳体系有问题：
①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
②凝胶没有凝固好；
③琼脂糖质量差。
（9）若为PCR试剂盒则可能：
①由于运输储存不当引起试剂盒失效；
②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
（10）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。
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