激光显微细胞分离技术

激光显微细胞分离技术
美国国立健康研究院肿瘤研究所病理研究室与生物医学设备组合作研发激光俘获显微切割技术，发展为Acturus 的PixCell II系统。在操作这套系统时，首先在组织切片上覆盖一层透明的膜，在显微镜下观察该组织切片，选择某一特殊细胞后，开启脉冲式红外激光束，使膜融化变得粘性很强（该膜的成份为 Ethylene Vinyl Acetate Polymer），等到冷却后将该位置的细胞牢固地粘附在上面从而分离细胞。
该种方法较以往方法改进之处：首先，它简单，不需要移动任何切片部位，一步即可完成从组织中分离特殊细胞，这些在膜上的细胞依然保持其原有的形态，使用无菌、一次性的膜可zui大限度地避免可能的污染。这对于后续进行PCR检测是尤为重要的。其次，使膜活化所需的激光能量很小（<50mW），与常规显微配合是充足的，完够满足临床病理组织细胞显微分离的需要。再者，LCM技术分离细胞速度较以往方法有很大提高，例如，从肾组织切片中分离一个肾小球（Glomerulus）所需时间小于10秒，一小时内即可轻松地分离上百个肾小球。
神经系统主要由两类细胞组成：神经元和胶质细胞。在脑内，不同解剖区域行使不同功能，这里所讲的解剖区域是指核团。核团在显微镜下才可以辨别，是相对集中在一个区域的可能行使一定功能的神经元和胶质细胞的集合体。把某个核团从脑内取出来是不太现实的。脑内核团数以百计，如果要想研究基因在脑内核团的表达水平，在以前只能用原位杂交技术。
如果要想研究蛋白质的表达水平或磷酸化等状态，只能用免疫组织化学技术。而这两个技术虽然能定位基因或蛋白质在脑内核团的表达情况,缺点是通量小。
因此，如果研究者主要是为了研究很多种基因在特定核团的神经元或胶质细胞的表达情况，新的解决方案之一就是组合LCM技术、RNA扩增技术和基因芯片技术。即利用LCM技术将特定核团的神经元或胶质细胞取出，提取总RNA或mRNA，RNA反转录为cDNA并进行扩增.zui后将cDNA标记为探针，和基因芯片杂交。如果研究的基因种类数不多，那么也可以只提取LCM获得的细胞的总RNA，利用定量RT-PCR技术来进行基因表达分析。

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