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    上海研域生物原代细胞冻存和复苏​检测方法包括以下步骤

    发布时间: 2024-05-28  点击次数: 130次

    我们知道,在原代细胞培养检测实验在实验仪器等工作上都要耗费不少的人力和体力。好在很久以前就有高人发明了原代细胞保存这个实验步骤,将暂时多出来的原代细胞冰冻保存,保存细胞活力。


    原代细胞复苏是一个简单的试验操作,但操作中也有许多需要注意的事项,在实验操作中注意细小的问题,才能使复苏后的细胞保持良好的状态,针对原代细胞复苏应该注意以下几点:

    1. 可以提前把需要的体积的培养液放到培养瓶里,拧松瓶盖,放到孵箱里30分钟--1个小时; 

    2. 为防止冻存管在升温时出现爆裂等情况,可以在放入水浴前就把超净台里的盖子拧松一下然后再拧上;

    3. 水浴温度37℃左右。


    一、慢冻程序

    1.  标准程序:采用细胞冻存器

    当温度在-25 ℃以上时,1~2 ℃/min;

    当温度达-25 ℃以下时,5~10 ℃/min;

    当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中。

    2.  简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2 ℃的速度,在40 min内降至液氮表面过夜,次日早晨投人液氮中。

    3.  传统程序:冷冻管置于4℃ 10 分钟→ -20℃ 30 分钟→ -80℃ 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽长期储存。


    二、低温保护剂的应用

    在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。

    常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。


    三、保存细胞的复苏方法

    1.  快速解冻

    冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1 分钟内全部融化(不要超过3 分钟)。

    2.  解冻后的细胞可直接接种到生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜培养液替换旧培养液,以去除DMSO。

    3.  如果细胞对冷冻保护剂特别敏感

    解冻后的原代细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到生长培养液的培养瓶中。


    上海研域生物应保证清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸,并可以使实验中用到的“花板"降至限度。从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。

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