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    上海研域生物细胞珠免疫荧光速度快的特点

    发布时间: 2024-06-25  点击次数: 427次

    细胞株免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导,细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合,原理就是利用抗原-抗体反应之后,采用荧光标记,标记完成后,显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少


    从而做出一个定位研究,也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导,细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点,是目前比较常用的组织学技术,也是比较准确的。

    一、实验方法原理

    在进行细胞免疫荧光过程中,需要用到细胞爬片,通过将爬片浸在细胞培养基内,细胞在爬片上生长,进而进行细胞的免疫荧光。

    二、实验材料

    1. 细胞样品。

    2. 试剂、试剂盒:多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton  BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油。

    3. 仪器、耗材:玻片。


    三、细胞株爬片免疫荧光实验步骤

    1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min。

    2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min。

    3. 0.5%Triton X-100(PBS配制)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤)。

    4. PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min。

    5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜。

    6. 加荧光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min。注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

    7. 复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5minx4次洗去多余的DAPI。

    8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。


    注意事项

    1.取细胞株爬片时,动作应轻柔,防止将细胞爬片夹碎,影响实验进程。

    2.种细胞过程中,要注意将细胞轻柔混匀,“八"字或者“十"字形摇晃,防止细胞局部生长过密。


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