2015年ELISA试剂盒相应的抗体结合

    酶免疫测定(enzymeimmunoassay)可分为均相(homogenous)和非均相(heterogenous)两种类型。在均相EIA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。ELISA试剂盒例如在某种条件下，抗原抗体反应后形成的酶标记抗原抗体复合物中的酶失去其对底物作用的活力，因而测出的酶活力直接反映游离的酶标记物。

    均相EIA在临床检验中较少应用。非均相EIA需先进行游离的和结合的标记物的分离。如前所述，固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年zui初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzymelinked immunosorbent assay)，简称ELISA，在国内有译作酶联免疫吸附试验的，虽然含义不*确切，但已习用。如上所述，免疫测定是一种很敏感的测定方法，抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀或浊度，敏感度可达5~10μg/ml，但在临床检验中，某些待测物在标本中的含量远低于这一水平，因此要寻找增加敏感度的方法。

    标记的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标记，通过测定标记物来提高敏感度。在放射免疫测定和酶免疫测定中，标记物分别为放射性核素和酶，zui后用测定放射性和酶活力来计算待检物的量，敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。但是这种特异性也不是的。假使两种化合物有着部分相同的结构，ELISA试剂盒在抗原抗体反应中可出现交叉反应。例如：绒毛膜促性腺激素(hCG)和黄体生成激素(LH)均由α和β两个亚单位组成，其结构的不同处在β亚单位，而两者的α亚单位是同类的。用hCG免疫动物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗体，抗α-hCG抗体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。在临床检验中，如用抗hCG抗血清作为妊娠诊断试剂检定尿液中hCG，只能用于hCG浓度较高的试验，否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。因此在作为早孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG，以避免与其它激素的交叉反应的发生。
1.3.4 敏感性
在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml，免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。标记的免疫测定的敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平。例如，用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定HBsAg，其敏感度可达0.1ng /ml。
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原，ELISA试剂盒因此免疫测定的应用范围极广，在临床检验中可用于测定：
1) 体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾体激素等。
3) 抗生素和药物。
4) 病原体抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等。