做大鼠ELISA试剂盒的经验总结

    本人在刚开始做大鼠ELISA试剂盒时就面临很多困难，虽然有师兄师姐铺路，但还是常常做得一塌糊涂，比如说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低。。。。。。自己也为此苦恼过很长一段时间，随着自己技术水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气，也是熟能生巧吧，现在做方阵，做ELISA已是轻车熟路了，以前检测一种抗体用整整一下午还算得晕晕的，现在给我十个八个的从包被到显色，一个工作日基本搞定。

下面就由我抛砖引玉地来说一下:

1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、大鼠ELISA试剂盒兔血清或BSA等封闭。

2.在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。大鼠ELISA试剂盒蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。