趋化因子配体5 （RANTES/CCL5）ELISA 检测试剂盒

ELISA 检测试剂盒试验原理：

RANTES/CCL5试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知RANTES/CCL5浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将RANTES/CCL5和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中RANTES/CCL5的浓度呈比例关系。

ELISA 检测试剂盒内容及其配制

自备材料

• 蒸馏水。
• 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
• 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

• 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
• 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
• 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

• 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
• 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
• 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
• 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
• 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
• 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
• 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
• 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
• 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法

• 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
• 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
• 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
• 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
• 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。