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    ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤

    发布时间: 2014/10/21  点击次数: 887次
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    ELISA试剂盒实验中所需要用到的试剂:

    1、浓缩酶联物; 5、弱阳性对照;
    2、标本稀释液; 6、预包被微孔板;
    3、终止液; 7、底物A、B;
    4、阳性对照; 8、阴性对照。

    ELISA试剂盒实验检验过程:
    1、配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中,长期可存于2—8℃环境中。
    2、配制酶联物 按1:101倍稀释,即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量),未用完的丢弃。
    3、待试剂盒平衡至室温后,待测标本按1;51稀释,即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。
    4、将稀释标本置37℃环境中20min。
    5、各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中,空白对照孔加100u1标本稀释液,盖好反应板,置37℃环境中30min。
    6、甩尽板中液体,每孔用200~300ul洗涤液洗5次,每次均需拍干。
    7、每孔加酶联物100~1,盖好反应板,置37℃环境中30min。
    8、甩尽板中液体,洗5次,每次拍干。
    9、加底物A、B各1滴或各50tzl,混匀,置37℃环境中15min。
    10、取出,加终止液1滴,用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液,直接判断结果。
    实验过后,我们要做一个结果判断:
    1、阴性对照平均OD值须小于0.20。
    2、弱阳性对照平均OD值须在0.20—0.65。
    3、弱阳性对照与阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时,本试验结果可信,否则重复实验。
    4、若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深则判为阳性,反之为阴性。但在弱阳性对照值上下10%范围内再测1次,如确实高于弱阳性对照则可判为阳性。

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