人黑色素细胞抗体ELISA试剂盒操作方法

样品收集、处理及保存方法：

 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原

和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红

细胞迅速小心地分离。

2、  血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、  细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、  组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

 5、  保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人黑色素细胞抗体ELISA试剂盒操作步骤：

   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
   在450nm波长处测定各孔的OD值。