肾上腺皮质抗体（ACA）ELISA试剂盒实验需求

肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的器材
（1） 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，人ELISA试剂盒ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
（2） 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的试剂
（1） 包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml
（2） 洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml
（3） 稀释液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 人ELISA试剂盒加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。
（4） 终止液（2M H2SO4）： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。
（5） 底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M柠檬酸（19.2克/L） 24.3ml 加蒸馏水50ml。
（6） TMB（四甲基联苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml 底物缓冲液（PH5.5） 10ml 0.75%H2O2 32μl
（7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物缓冲液（PH5.5） 1ml 3%H2O2 2μl 
（8） 抗原、抗体和酶标记抗体。
（9） 正常人血清和阳性对照血清。

肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的包被：
包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的zui适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。

肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的封闭：
封闭（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。zui常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其zui大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。