大鼠降钙素基因相关肽酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书

大鼠降钙素基因相关肽酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：大鼠降钙素基因相关肽（CGRP）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中降钙素基因相关肽（CGRP）的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠降钙素基因相关肽（CGRP）水平。用纯化的
大鼠降钙素基因相关肽（CGRP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入
降钙素基因相关肽（CGRP），再与 HRP标记的 CGRP 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复
合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的
作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽（CGRP）呈正相关。用
酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠降钙素基因相
关肽（CGRP）的含量。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液 50ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（45ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张  
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本处理及要求
1．血清、血浆标本可直接测定；
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反
复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别
加标准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；再各取 100μl 分
别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后，在第
三孔和第四孔中先各取50μl弃掉；再各取 50μl分别加到第五、第六孔中；再在第五、
第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加
到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、
第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（ 稀释后各孔加样量都为 50μl，浓 度分别为  30                 
ng/L，20 ng/L ，10 ng/L，5 ng/L，2.5 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。    
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔*孔OD值的），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
6．本试剂不同批号组分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．底物请避光保存。
检测范围：
2 ng/L -40 ng/L
规格：
96 人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月