大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书

大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（PAMPK）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶
（PAMPK）含量。
实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（PAMPK）水平。用
纯化的大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（PAMPK）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包
被单抗的微孔中依次加入已知浓度的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（PAMPK）标准品和未知
浓度的 PAMPK 待检样品，温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体，再与链霉亲和素-HRP
结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP酶的催化下转化
成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的磷酸化腺苷酸活化蛋白
激酶（PAMPK）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线
计算样品中大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（PAMPK）浓度。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液 50ml×1 瓶 标准品S1（90 pmol/L） 0.5ml×1瓶
2 链霉亲和素-HRP 6ml×1 瓶 标准品S2（60pmol/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 标准品S3（30pmol/L） 0.5ml×1瓶
4 生物素标记的抗-IgG 抗体 6ml×1 瓶 标准品S4（15pmol/L） 0.5ml×1瓶
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶
9
标准品S5（7.5pmol/L ） 0.5ml×1瓶  
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1 个
7 终止液 6ml×1 瓶 11 封板膜 3 张
8 样品稀释液 6ml×1 瓶 12 说明书 1 份
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤
1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复
孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗-IgG抗体，链霉亲和素-HRP，
其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl，在
样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品zui终稀释度为5 倍），
盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
3. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用2
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 4次，拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl（空白孔除外）。
37℃温育30分钟
6. 洗涤：操作同 4。
7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP（空白孔除外），轻轻振荡混匀，
37℃温育30分钟。
8. 洗涤：操作同 4。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先将样本
稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数（×5×n）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
线形范围：
5pmol/L -100pmol/L
规格：
96 人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月