大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书

大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：大鼠磷酸化乙酰辅酶 A 羧化酶（pACCase）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆中大鼠磷酸化乙酰辅酶 A羧化酶（pACCase）  含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（pACCase）  水平。
用纯化的大鼠磷酸化乙酰辅酶 A 羧化酶（pACCase）  抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包
被单抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（pACCase）  再与HRP标记的大鼠磷
酸化乙酰辅酶 A羧化酶（pACCase）  抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗
涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终
的。颜色的深浅和样品中的大鼠磷酸化乙酰辅酶 A 羧化酶（pACCase）  呈正相关。用酶
标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化乙酰辅酶
A羧化酶（pACCase）  浓度。 
试剂盒组成 
1  20 倍浓缩洗涤液  30ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  标准品（270ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 张   
6  显色剂 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标
准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，
浓度分别为 180ng/L，120ng/L  ，60ng/L，30ng/L， 15ng/L）。
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。   
4.  配液：将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 
7.  温育：操作同 3。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
 
计算
   以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值
大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
检测范围：
10ng/L -200ng/L
规格：
96 人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月