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    斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)酶联免疫分析

    发布时间: 2019/4/25  点击次数: 46次
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    斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)酶联免疫分析试剂盒运用说明书
    本试剂盒仅供研究运用。
    检测规模:  96T 12 U/L -550 U/L

    运用意图:本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中酰基辅酶A(Acyl-Coa)活性。
    斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)酶联免疫分析试剂盒试验原理
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)水平。用纯化的斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次参加酰基辅酶A(Acyl-Coa),再与HRP标记的酰基辅酶A(Acyl-Coa)抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。颜色的深浅和样品中的酰基辅酶A(Acyl-Coa)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),经过规范曲线核算样品中斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)活性浓度。 

    试剂盒组成 

    标本要求 
    1.标本收集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行试验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)酶联免疫分析试剂盒操作步骤



    2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品精确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
    3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
    4.配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用
    5.洗刷:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    6.加酶:每孔参加酶标试剂50μl,空白孔除外。 
    7.温育:操作同3。
    8.洗刷:操作同5。
    9.显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色10分钟.
    10.停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。
    11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
    斑马鱼酰基辅酶A(Acyl-Coa)酶联免疫分析试剂盒操作程序总结:


    核算
      以规范物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出规范曲线,根据样品的OD值由规范曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用规范物的浓度与OD值核算出规范曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,核算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实践浓度。 
    注意事项
    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    2.浓洗刷液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响成果。
    3.各步加样均应运用加样器,并常常校正其精确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,引荐运用排枪加样。
    4.请每次测定的一起做规范曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,核算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性运用,以避免交叉污染。
    6.底物请避光保存。
    7.严格依照说明书的操作进行,试验成果判定有必要以酶标仪读数为准.
    8.所有样品,洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。
    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    保存条件及有效期
    1.试剂盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6个月
     

     

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