斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）酶联免疫分析

斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）酶联免疫分析试剂盒运用说明书
本试剂盒仅供研究运用。
检测规模：  96T 12 U/L -550 U/L

运用意图：本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中酰基辅酶A（Acyl-Coa）活性。
斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）酶联免疫分析试剂盒试验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）水平。用纯化的斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中顺次参加酰基辅酶A（Acyl-Coa），再与HRP标记的酰基辅酶A（Acyl-Coa）抗体结合，构成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终究的。颜色的深浅和样品中的酰基辅酶A（Acyl-Coa）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），经过规范曲线核算样品中斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）活性浓度。 

试剂盒组成 

标本要求 
1．标本收集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3按捺辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）酶联免疫分析试剂盒操作步骤



2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4.配液：将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔参加酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7.温育：操作同3。
8.洗刷：操作同5。
9.显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色10分钟.
10.停止：每孔加停止液50μl，停止反响（此刻蓝色立转）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
斑马鱼酰基辅酶A（Acyl-Coa）酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：


核算
  以规范物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出规范曲线，根据样品的OD值由规范曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用规范物的浓度与OD值核算出规范曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，核算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实践浓度。 
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗刷液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。
3．各步加样均应运用加样器，并常常校正其性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。
4．请每次测定的一起做规范曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于规范品孔第yi孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，核算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性运用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格依照说明书的操作进行，试验成果判定有必要以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期
1．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月