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    大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)酶联免疫分析试剂盒

    发布时间: 2020/2/7  点击次数: 140次
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    大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)酶联免疫分析试剂盒
    本试剂盒仅供研究使用。
    检测范围:96T
    0.5nmol/L - 17nmol/L
    使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原 N末端肽(NTX)含量。
    实验原理
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Ⅰ型胶原  N 末端肽(NTX)水平。用纯化的大鼠Ⅰ型胶原 N 末端肽(NTX)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型胶原 N末端肽(NTX),再与  HRP标记的Ⅰ型胶原  N末端肽(NTX)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)呈正相关。用酶标仪在  450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠Ⅰ型胶原 N末端肽(NTX)浓度。

    试剂盒组成

    大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)酶联免疫分析试剂盒标本要求
    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
    马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
    2.不能检测含NaN3的样品,因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步骤
    1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
    释。

    2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
    待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

    4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。
    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此
    重复 5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
    7.温育:操作同 3。
    8.洗涤:操作同 5。
    9.显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
    15分钟。
    10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
    液后 15分钟以内进行。
    大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)酶联免疫分析试剂盒操作程序总结:

    计算
    以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)酶联免疫分析试剂盒注意事项
    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
    用完,板条应装入密封袋中保存。
    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
    控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
    4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD值
    大于标准品孔第yi孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
    算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物请避光保存。
    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
    9.本试剂不同批号组分不得混用。
    10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
    保存条件及有效期
    1.试剂盒保存:2-8℃。
    2.有效期:6个月
     

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