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    大鼠 Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA检测试剂盒

    发布时间: 2020/4/23  点击次数: 258次
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    大鼠 (Rat) Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA 检测试剂盒

    本试剂仅供研究使用     
    试验原理:
    TLR-4试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知TLR-4浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TLR-4和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TLR-4的浓度呈比例关系。
    试剂盒内容及其配制

    大鼠 (Rat) Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA 检测试剂盒自备材料
    1.蒸馏水。
    2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    3.振荡器及磁力搅拌器等。
    安全性
    1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
    2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
    3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
    操作注意事项
    1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
    2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
    3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
    4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
    5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
    6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
    7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
    8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
    9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
    大鼠 (Rat) Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
    1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
    2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
    3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
    4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
    5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
    试剂的准备
    1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

    2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

    大鼠 (Rat) Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA 检测试剂盒操作步骤
    1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
    2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
    3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
    4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    5.每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
    6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
    8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
    9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
    建议使用的实验方案
    标准品浓度(ng/ml)



    大鼠 (Rat) Toll样受体-4 (TLR-4) ELISA 检测试剂盒局限
    6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
    试剂盒性能
    1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
    2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
    3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
    结 果 判 断 与 分 析
    1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
    2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的TLR-4标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的TLR-4含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
    3、检测值范围:0-8.0ng/ml
    4、敏感度: 0.01 ng/ml
     

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