噬菌体效价测定法

双层琼脂培养法
1. 将之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时.
2. 以1% peptone为稀释液,将噬菌体原液做10倍序列稀释,一般稀释至107倍即可.
3. 取噬菌体稀释液100 μl 与寄主菌液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染.
4. 将上述混合液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中,均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上.
5. 将平板置于适合的温度下,一般培养8~24小时,待溶菌斑产生后观察并计算其数目.
6. 噬菌体效价（pfu/ml）＝溶菌斑数×稀释倍数×取样量折算数
   例如:噬菌体原液稀释倍数为107,取样量测定量为0.1ml （则取样量折算数为10）,三个平板的溶菌斑数目分别为275、252、263,则噬菌体原液的效价为:1/3（275+252+263）×107×10＝2.63×1010 （pfu/ml）

点滴法
1. 将之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时.
2. 取300 μl寄主细菌悬浮液加入5 ml冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中,均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上,并静置30分钟以上使其凝固.
3. 以1% peptone为稀释液,将噬菌体原液做10倍序列稀释,一般稀释至107倍即可.
4. 将平板划分为八个区域,以pipetman取不同稀释倍数之噬菌体稀释液各1 μl,分别接种于不同的区域上.
5. 将平板置于适合的温度下,一般培养8~24小时,待溶菌斑产生后观察并计算其数目.一般噬菌体浓度太高的区域会融合成一个大的溶菌斑,而浓度适中的区域会形成肉眼可观察的溶菌斑.
6. 噬菌体效价 （pfu/ml）＝溶菌斑数×稀释倍数×取样量折算数
   例如:噬菌体原液稀释倍数为106,取样测定量为0.001 ml （则取样量折算数为1000）,三个滴定点的溶菌斑数目分别为15、18、16,则噬菌体原液的效价为:1/3（15+18+16）×106×1000＝1.63×1010 （pfu/ml）