怎么挑选到合适自己试验的抗体

一、关于特异性的挑选：特异性的挑选首要需求考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、试验办法特异性、符号物的特异性。
1、蛋白特异性：针对需求检测的蛋白查找抗体，几个细节要差异，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，留意检查抗体阐明书的检测阐明。如果重组蛋白不是全长表达，则需求留意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白能清楚其剪切与润饰的办法，特别表型的蛋白需求进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，检查穿插反响的状况。磷酸化蛋白检测需求断定详细位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜混为一谈。
2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。现在大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或规划多肽抗原的，依据蛋白的同源性的状况与其他种属发作穿插反响。需求参照阐明书注明的可反响种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，能够经过蛋白的序列比对，挑选同源序列免疫的抗体，不过一般这种状况生产商不会受理其关于质量的申述，如果能够申请到免费的抗体样品，则利于抗体挑选。
3、试验办法特异性：现在运用抗体的试验办法有许多，不同的运用办法过程中，由于对蛋白样品的处理办法不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的辨认表位和效价要求都是不一样的。详细的依据阐明书注明的产品应用办法进行挑选。可是生产商一般不会将每个抗体都进行各种试验的检测，现在检测比较多的仅仅WB、IHC、IF等，如果针对详细的试验办法没有找到适宜的抗体的，能够结合蛋白序列剖析和抗体的抗原信息，挑选尽可能有作用的抗体。相同，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。
4、符号物的特异性一般依据试验操作的试验办法不会运用带有符号的一抗，比方WB、IHC等，都是经过二抗类的试剂符号到达成果出现的意图。可是依据仪器剖析的一些试验，可能就会运用到直接符号的一抗，比方流式试验。那么需求了解到自己即将运用的仪器能检测到的荧光规模，不通的参数要求挑选对应的符号物。在免疫荧光双标试验中，需求选配不同的荧光物。

二、抗体种属来历的挑选：有人认为单抗比多抗好，其实这并不是一个谨慎的观念，只能说在可能性上单抗的特异性更好一些，而多抗的亲和力会优于单抗，而且特异性并不必定就逊于单抗，首要看抗原的规划水平。现在商品化抗体里单抗首要是鼠单抗、兔单抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他种属来历抗体较少。不主张纠结于单抗好仍是多抗好，能做出试验的抗体就是好抗体。在挑选上一般主张试验种属和抗体种属亲缘性越远越好，不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标试验中，需求在差异于试验种属的基础上，差异开两个目标的抗体种属来历，以便于二抗差异辨认。

三、关于性价比的挑选：抗体的质量凹凸zui终仍是需求经过试验成果来出现的，可是在挑选抗体之前我们并无法准确判别抗体的作用怎么。不论什么品牌的，不论进口仍是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体归于异质化产品，不同品牌之间，乃至同一品牌的不同产品之间，抗体质量差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体挑选中zui难的一个问题。许多人习惯于依据试验室传统认识或参考文献上运用的产品进行挑选，可是由于不同批次间的抗体作用也是有差异的，所以并不能*保证正确挑选。在这种状况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体质量障碍时，能够保证有效地解决问题，不至于影响试验的发展。现在有部分品牌能够供给免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先断定抗体是否合适自己的试验，能够防止由于抗体质量投诉耽搁试验组织。在价格方面，需求谨记，zui贵的不必定就是的，zui合适你的试验的才是的。花许多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时刻去投诉的状况并不罕见。只买对的，不买贵的。在挑选价格的时分还要留意标准大小、抗体浓度、效价规模等，要归纳考虑。在标准方面，依据zui终能够稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。许多老品牌供给的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的试验而言，过大的包装有时会形成很大的浪费。现在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相继推出小包装的抗体，这在必定程度上给挑选者更大的挑选自由度，能够依据运用产品的效价，计算出自己实际需求的抗体量，做到精断定量收购。

四、关于品牌的挑选：由于抗体质量的异质化，关于抗体的品牌挑选就被我们所重视，可是不论是什么品牌都难免会遇到不合适自己试验的抗体。所以一般主张考虑那些业内遍及认可、购买便利、专业、售后处理快捷的品牌。一些乃至都没有正式署理的，只能备选。一起购买时必定要找能够供给产品辅导、试验剖析、售后处理的正规署理商购买，防止由于买到假货水货影响试验。

五、关于其他一些小细节：抗体挑选与运用过程中，多少还会遇到一些意想不到的工作。有些细节，仍是需求多留意一些。如在挑选做阻断或中和试验时，有时需求将抗体加到细胞培养液中，这是需求留意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体，进行分装是比较节约的办法，如果是价的，能够配成母液再分装。抗体的短时刻运送，用普通冰块坚持温度是能够满足要求的。别的不要纠结于WB过程中分子量的问题。许多时分，我们看到相同的抗体，不同的品牌，乃至同一品牌不同的货号，标注的分子量都不一样。其实可能仅仅生产商只检测时运用了不同的种属不同的样品类型，或是参照了不同的文献，对运用者来说，相同的样品，不论运用哪个品牌的，只需抗体是对的，意图条带只会出现在相同的方位。关于分子量的问题，一般不主张看产品阐明，WB中条带的方位由样品决议，并不会由于抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前，我们能够经过数据库或参考文献，对即将检测的蛋白做个比较全面的了解，包含其可能剪切与润饰的状况、表型的状况等。在*次运用一个新的抗体时，不要依据分子量横向剪膜，能够保留几个全泳道，看看条带方位或散布的状况。