牛泰勒虫抗体（Theileria）ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中泰勒虫病（theileriasis）的表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛泰勒虫病（theileriasis）表达。用纯化的牛泰勒虫病

（theileriasis）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中泰勒虫病（theileriasis）相结合，经

洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的泰勒虫病（theileriasis）抗体结合，形成

抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下

转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD

值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中牛泰勒虫病（theileriasis）的存在与否。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为泰勒虫病（theileriasis）阴性

阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为泰勒虫病（theileriasis）阳性

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