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基本信息
细胞名称 : HEP-53.4 小鼠肝癌细胞
细胞别名 : HEP-53.4 ; 53.4 ; 小鼠肝癌细胞
细胞来源 : 德国
细胞鉴定 : STR鉴定已通过
细胞形态 : 上皮样细胞,贴壁生长
培 养 基 : DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%
培养条件 : 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%
冻存条件 : 无血清冻存液,液氮储存
细胞背景 : 来源于 C57BL/6J小鼠的原发性肝细胞癌,这些小鼠肝细胞忠实地代表了肝细胞癌,并为研究这种类型的肝癌提供了有价值的模型,同义词HEP-53.4和53.4,它们便于识别和交叉引用,肝细胞癌是一个重大的健康问题,这些细胞能够对其分子通路、细胞相互作用和治疗策略进行精确研究,这些细胞起源于Mus musculus(小鼠),为理解和开发肝细胞癌的治疗方法提供了相关的模型系统。
细胞用途 : 仅供科研使用
细胞货期 : 现货,1周左右
注意事项
1. 常规消化收集细胞离心。
2. 离心后去掉离心管内上清,加入1ml左右重悬细胞混匀,建议轻轻晃动或者轻轻吹打细胞, 放入培养箱消化细胞,再消化1min左右。
3. 消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入3-5ml含血清的培养基混匀以终止消化,离心去除
4. 加入5ml左右的细胞相应的培养基混匀,按比例接入培养瓶/皿中。
5. 显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞,若有少量成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。
常温发货
收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售,密度达标就可以传代。前期传代比例1:2,等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管,另外一瓶继续传代,反复冻存2-3只后才扩增做实验,以防突发情况引起断种。
干冰发货常规细胞发货冻存管2只,复苏1只,另外一只备用,第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个,均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知我们。
贴壁细胞
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化3.3.3.3.3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
4. 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
5. 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。
悬浮细胞
HEP-53.4 小鼠肝癌细胞悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL(不同细胞对密度要求不同)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。
运输形式低温:1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
常温: T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
生物安全
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
特别注意
该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好,大部分的DMEM含有较高浓度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/L NaHCO3)培养基培养细胞时需要提高CO2浓度(7%-10%)。