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    我司分享:关于细胞传代的操作

    发布时间: 2020-04-08  点击次数: 133次

    1.细胞吸除培育瓶内旧培育液。

     

    2.参加无菌pbs洗液(5-8mL)悄悄润湿细胞,稀释多余的培育基,之后吸走洗液,动作要轻,不可吹打到细胞。

     

    3.向瓶内参加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少许,以能覆满瓶底为限。 

     

    4.置温箱中2~5分钟,一旦镜检发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,细胞变圆,比较松动后,当即终止消化。

    5.参加该细胞对应的培育基6mL(T25培育瓶)或12mL(T75培育瓶)终止消化。

     

    6.用吸管通过吸取的培育基悄悄反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以少的次数将细胞从壁上吹下,不只要操控吹打的力度、次数,还要留意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能削减死细胞,又能便于细胞再次均匀贴壁成长。

     

    7.依据传代份额,将细胞悬液分瓶,再补充培育基后,静置于温箱培育,直止贴壁。

     

    贴壁细胞在培育瓶长成致密单层后,持续成长的空间缺乏,培育基中的养分成份也耗费较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培育,对细胞进行传代扩增。关于贴壁不太紧的细胞如293,能够直接吹散后分瓶。而关于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

     

    关于悬浮细胞换液时只需要补液就行。

     

    悬浮细胞的传代则不需要用胰酶消化,直接通过计数算好传代的份额,直接分瓶,补液。有些悬浮细胞趋于成团成长,此刻细胞成长状态杰出,当补液时,防止吹打。典型实例:jurkat便是成团成长。当jurkat细胞密度比较大时,可将培育瓶竖直放置2分钟左右,待大部分细胞沉下,吸走上层清液,补充等量的新鲜培育基。

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