PCR在临床中的应用（二）

1、检测甲型病毒性肝炎

 HAV为甲型病毒性肝炎的病原体。甲型肝炎病毒为嗜肝RNA病毒。抗-HAV IgM和抗-HAV IgG等抗体成分为其血清标志物。[临床意义]  血液中抗-HAV IgM型抗体在发病后1~2周内出现，3个月后滴度下降，6个月后不易检出， 该抗体阳性，即可诊断为急性甲型肝炎。抗-HAV IgG出现较抗-HAV IgM稍晚，一般终身存在，是一种保护性抗体，可用于甲肝的流行病学调查。

 2、检测戊型肝炎病毒

是一种RNA病毒。临床诊断HEV的血清标志物为抗- HEV IgM 和抗- HEV IgG。 健康人检查结果均为阴性。 抗- HEV IgM 阳性反应，可诊断急性戊肝，持续时间2~3个月。恢复期患者血清中可检出抗- HEV IgG，持续时间约1年。

 3、检测丁型肝炎病毒

是一种RNA病毒。临床诊断HDV的血清标志物为HDV Ag、抗- HDV IgM 和抗- HDV IgG 等三种。 健康人检查结果均为阴性。  H DV感染时，HDV Ag阳性。抗- HDV IgM 阳性，见于急性HDV感染。抗- HDV  IgG阳性，是诊断慢性丁肝的可靠血清学指标。

 4、尖锐湿疣患者外周血中HPVDNA的检测

尖锐湿疣（CA）病情顽固，极易复发。过去的研究一直认为HPV是严格的亲上皮病毒。但有人研究发现血液中能检出HPVDNA。中国医科大学附属*医院皮肤科的研究人员推测尖锐湿疣在HPV感染的病程中可能存在病毒血症，可能是易感部位CA复发或其他部位出现CA病变的病毒来源。为此研究人员对30例CA患者外周血中HPVDNA进行了检测。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测30例CA患者皮损和外周血中的HPVDNA，20例正常人外周血作对照。采用限制性内切酶RsaⅠ、PstⅠ对HPV做分型鉴定。选取1例皮损与外周血均为阳性的PCR产物进行测序。结果：30例CA患者皮损均检出HPVDNA，血浆中未检测到HPVDNA，有8例外周血单一核细胞（PBMC）中检测到HPVDNA（阳性率为26.7％），20例正常人对照为阴性。两组阳性率经χ2校正检验χ2＝4.52，P＜0.05，差异有显著性。酶切和测序结果显示，PBMC中的HPV型别与其皮损处的型别有一致性。结论：CA患者在HPV感染的病程中可能存在病毒血症，这可能是CA易于复发的原因之一。本研究结果提示，病毒在局部大量繁殖有可能破坏局部基底膜带，通过血管入血。此外，在PBMC中检测到HPV提示，该病可能有性传播以外的途径经血行传播的可能。

5、评价荧光定量PCR（QPCR）技术对不孕症妇女宫颈沙眼衣原体和解脲支原体检测意义.

方法:用QPCR技术对60例不孕症患者（不孕组）及78例正常生育者（对照组）行宫颈沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）检测.结果:不孕组宫颈分泌物CTDNA、UUDNA及混合感染阳性检出率明显高于对照组（P＜0.05＝.结论:QPCR对不孕症患者宫颈CTDNA、UUDNA的检测特意性强、快速、灵敏,临床应用价值高. 
 
 6、快速诊断将宫颈粘膜、皮肤、口腔、角膜等组织细胞涂片后，用特异性抗体作间接免疫荧光或免疫组化染色法检测病毒抗原；Wright-Giemsa染色镜检，如发现核内包涵体及多核巨细胞，可考虑HSV感染；将疱疹疱液进行电镜负染可迅速确诊。原位核酸杂交和PCR法可用于检测HSVDNA。PCR产物的特异性鉴定选用Southernblot法，脑脊液PCR扩增被认为是诊断疱疹性脑炎的*手段。此外，DNA酶切图谱也可作HSV鉴定和型别分析。HSV抗体测定对临床诊断意义不大，仅用于流行病学调查



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PCR在临床中的运用（一）