ELISA试剂盒实验“花板”问题分析

ELISA试剂盒结果“花板”的问题对检测数据造成了很大影响，往往会使检测者做出误判，是实验中必须要注意和避免的。

使用ELISA试剂盒对血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等实验检测的结果中，空白和阴性，阳性对照以及室内质控孔结果正常，根据卫生部临检中心提供的数据，HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范围均为2NCU，但血液标本孔的OD值比较高（大多数OD值≥0.070）。标本的阳性率很高，每板除对照孔外，有时阳性高达10孔之多，而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。

针对这种“花板”现象我们通过多次实验的分析和判断，总结了一些经验，分析如下：

1 标本、试剂、仪器

1.1 标本 出入境人员的血液标本。

1.2 试剂 HBsAg、HCV、HIV、梅毒试剂均为不同厂家的ELISA试剂盒。

1.3 仪器 LD4-2型脑心机BID RAD1575型洗板机BID RAD550酶标仪。

2 方法

　　所有被检出入境人员的血液标本，按照各个厂家提供的ELISA试剂盒说明书进行HBsAg-HCV-HIV梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用。

3 结果

　　所使用不同厂家的试剂有时会出现“花板”问题。

4 分析

　　在所有标本进行检测的过程中，所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下，步骤均按照各种试剂说明书的要求去做，排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外，ELISA试剂盒内的空白、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常，只有检测的血液标本情况异常。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下，HBsAg在用ELISA之前都经过了快速金标试剂的检测，阳性标本得到了一定的控制。因此，原因可能是在标本的处理，特别是放置时间、离心速度和离心时间方面的问题。所以，标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。

为了避免“花板”现象的出现，降低检测的假阳性率，获取准确的实验结果，应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便省时的ELISA试剂。

实验过程中应该注意的问题:

（1）抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本，按比例加抗凝剂，便于离心，得到足够的血清（血浆）。

（2）血液标本应置于室温下1～2h，使血液凝固收缩，然后离心检测或让血液后再检测。这样才能使得血液充分收缩，让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至zui低。

（3）检测之前，加大离心转速，尽量延长时间，使血细胞和纤维蛋白充分沉淀，让血细胞与血清*分离。

（4）加样时不能加入红细胞或纤维蛋白，要按照操作说明书去做，否则会影响实验结果。

（5）封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。

（6）手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出，连成整体液面后产生“花板”。用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。