ELISA试剂盒抗体反响使抗原固相化及原理

ELISA试剂盒的基本原理有三条：
（1）抗原或抗体可经过共价键与酶衔接构成酶结合物，ELISA试剂盒而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性；
（2）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体外表，可能是蛋白和聚苯乙烯外表间的疏水性部分相互吸附，并坚持其免疫学活性；
（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可依据参加底物的颜色反响来断定是否有免疫反响的存在，并且颜色反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因而，能够按底物显色的程度显现实验成果。法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的流行症、寄生虫病及非流行症等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，ELISA试剂盒依据现已运用的成果，认为法具有活络、特异、简略、快速、稳定及易于自动化操作等特色。不只适用于临床标本的查看，并且因为一天之内能够查看几百甚至上千份标本,因而，也适合于血清流行病学调查。
ELISA试剂盒因而含杂质较多的抗原也可选用捕获包被法,实验的特异性、敏感性均由此得以改进，重复性亦佳。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的作用于。可将聚苯乙烯板先经紫外线照耀（例如30W紫外灯，75cm照耀12小时），以添加其吸附性能。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，ELISA试剂盒而遍及的固相载体一般不能直接与核酸结合。换言之，包被便是抗原或抗体结合到固相载体外表的进程。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充沛露出，在这种情况下，直接包被作用不佳，能够选用直接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，这以后经过抗原。也可用亲和素生物素体系作直接包被，即用亲和素先包被载体，然后参加生物素化的DNA，这种包被办法均匀、结实，已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。